所有產(chǎn)品僅供科研使用，不能用于食用和醫(yī)療等

C肽放射免疫實驗代測

通用名：碘[ 125I]人 C 肽放射免疫-分析藥盒

漢語拼音：Dian [ 125I] Ren C-tai Fangshemianyifenxi Yaohe

英文名：Iodine [ 125I] Human C–peptide Radioimmunoassay Kit

簡稱：碘[ 125I]- C-P 放免藥盒 [使用目的] 用于科研血清樣本中 C 肽(C-P)的定量測定

[用途] 1) 指導(dǎo)胰島素治療，對于胰島素治療的樣本，C 肽測定可以確定是否繼續(xù)使用胰島素治 療，還是用口服降糖藥或飲食治療。C 肽的測定值對糖尿病的治療具有重要意義。 2) 對低血糖綜合癥的診斷。 3) 對胰島移植和胰腺移植的樣本，C 肽測定可以了解移植是否存活和 B 細(xì)胞的功能。 4) 同時測定 C 肽和胰島素可了解肝病的變化，如肝硬化時，外周血 C 肽/胰島素的比值下 降。 5) 對胰島或胰腺腫瘤-治療后復(fù)發(fā)和功能的診斷。

[試驗原理] 本藥盒采用競爭放射免疫分析法，通過二抗沉淀抗原-抗體免疫復(fù)合物來測定血清中 C 肽的含量，待測血清、標(biāo)準(zhǔn)品中的 C 肽和 125I-C–P 與有*的抗體競爭結(jié)合。125I-C–P 一 部分與抗體結(jié)合為復(fù)合物，另一部分游離。加入分離試劑，離心使復(fù)合物部分沉淀，與游離 部分分離，棄去上清液，測定沉淀物的放射性計數(shù)。待測血清和標(biāo)準(zhǔn)中的 C 肽含量與與復(fù)合 物的放射性強度呈負(fù)相關(guān)，用一系列不同濃度的 C 肽作標(biāo)準(zhǔn)，可獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線 上可查出血清中 C 肽的含量。

[儀器] 1、 γ－計數(shù)器 2、 低溫離心機 3、 恒溫水浴箱 [樣本要求] 110 微升科研血清樣本。 采靜脈血 5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉(zhuǎn)／分離心，取其上清液，放置玻 璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-18℃~-25℃儲存 6 個月。 嚴(yán)重溶血、高濃度的脂類、膽-紅素對測定結(jié)果有影響。

[注意事項] 1) 收到分析試劑盒后，盡快存放在 2 – 8℃。 2) 由于 C 肽在溶液狀態(tài)下極不穩(wěn)定，所以先溶解標(biāo)記物、抗體，待一切準(zhǔn)備工作完畢后， 后溶解標(biāo)準(zhǔn)品。如果分析試劑盒一次用不完，要做若干次，那么把標(biāo)準(zhǔn)品溶解后盡快 分裝成若干份，并立即存放在–20℃保存，避免反復(fù)凍融。C 肽標(biāo)記物的分裝、使用、 保存同標(biāo)準(zhǔn)品程序，避免反復(fù)凍融。 3) 在加分離試劑前，將分離試劑搖勻。 4) 分析試管放在 4℃溫育時，好套上塑料袋，避免蒸發(fā)，保持一定的反應(yīng)體積。

[實驗方法] 1、 將實驗所需試劑及樣本放置室溫，凍干品按操作要求進(jìn)行溶解,平衡至少 30 分鐘 以上才可進(jìn)行操作； 2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號，所有實驗均做雙管重復(fù)； 3、 每個 NSB 管加入 200µl 溫育液，每個標(biāo)準(zhǔn)品“0"管 加入 100µl 溫育液； 4、 取每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品（A~F）、質(zhì)控血清和樣本 100µl 加入相應(yīng)編號的試管中； 5、 每管均各加入 100µl 標(biāo)記物工作液； 6、 除 T、NSB 管外，每管均各加入 100µl 抗體工作液，充分混勻； 7、 4℃溫育 24 小時； 8、 每管均各加入 500µl 分離劑后，充分混勻； 9、 室溫放置 15 分鐘后，離心 3500 轉(zhuǎn)／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液； 10、 用 γ-計數(shù)器測定每管 1 分鐘的放射性強度計數(shù)； 11、 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。

[實驗過程中應(yīng)注意] 1、 γ-計數(shù)器本底計數(shù)應(yīng)≤100CPM/分，效率應(yīng)≥75％； 2、 加入放射性標(biāo)記物時，應(yīng)做好防護、小心謹(jǐn)慎，以避免造成放射性污染； 3、 如果某一個樣本的測定值高于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品濃度，用零標(biāo)準(zhǔn)品以 1：2 或 1： 4 的比例稀釋樣本后重新測試，測試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

[質(zhì)量控制] 每次實驗操作應(yīng)至少采用兩個濃度的質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保每次實驗測定結(jié)果 的可靠性。 1、 質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi)； 2、 曲線方程應(yīng)采用佳擬合方式； 3、 重復(fù)樣本的測定結(jié)果相差在 15％以內(nèi)。 如不能同時滿足以上條件，則此次試驗結(jié)果無效，全部試驗需重新進(jìn)行。

[測定結(jié)果的計算] 1、 計算標(biāo)準(zhǔn)品（A~F）、質(zhì)控品和樣品與標(biāo)準(zhǔn)品 0 的比值（B/B0）; 2、 劑量-反應(yīng)曲線按“對數(shù)劑量-結(jié)合率對數(shù)"（Log(dose-Log(B/ B0))數(shù)學(xué)模型或 四參數(shù)數(shù)學(xué)模型擬合，通過每個標(biāo)準(zhǔn)品的 B/B0和其濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線； 3、 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣本的濃度值，B/B0不在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)的樣本及其濃度

[實驗的局限性] 1、 本品僅供體外診斷使用，只能用于科研血清樣本的測定而不能用于其他體液樣本； 2、 通過其它方法得到的 C-P 值與本品測定結(jié)果不具有直接的可比性；

C肽放射免疫實驗代測