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產(chǎn)品分類上海信帆生物代理銷售“丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒",現(xiàn)貨供應(yīng),提供技術(shù)指導(dǎo)和售后服務(wù),歡迎。
測定步驟
用蒸餾水于605nm處調(diào)零。
(1)取900μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中孵育5min。
(2)取出比色皿,加入50μL酶液,混勻;立即記錄605nm處初始吸光值A1,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)1min,記錄605nm處1min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒注意事項(xiàng)
1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。
2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
PDH活性計(jì)算
1、組織中PDH活性計(jì)算:
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。
PDH活性(U/mg prot)=反應(yīng)總體積(950μL)÷樣本體積(50μL)÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3)×ΔA ÷蛋白濃度(mg/mL)=905×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL)
(2) 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。
PDH(U/g 鮮重)=反應(yīng)總體積(950μL)÷樣本體積(50μL)÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3)×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL)=905×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL)
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中PDH活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。
PDH活性(U/mg prot)=反應(yīng)總體積(950μL)÷樣本體積(50μL)÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3)×ΔA ÷蛋白濃度(mg/mL)=905×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL)
(2) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。
PDH活性(U/104 cell)=反應(yīng)總體積(950μL)÷樣本體積(50μL)÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3)×ΔA ÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104 cell /mL)=905×ΔA÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104 cell /mL)
丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒
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